RNA seq建库，片段分选步骤，第一步是15μL beads，结合；上清转移，加10μL beads，然后洗脱。
如红框所示，应该意思是“全部”上清（共65 μL）转移，但是这样就容易吸到beads，因为65 μL是包括了beads本身的15 μL体积的。有次师弟看到10 μL beads后边写的0.2X，觉得10 μL是0.2X的话，那全部上清不应该就是指50 μL吗？我听了觉得非常有道理，所以后来还专门把我的protocol这里改成了明确的“转移50 μL上清到新的离心管”。
然后就按照这个Protocol建库过很多次了。知道今天，看到我的胶图，我突然发现，这个文库分布仿佛是比别人的要小很多啊，峰值大概在290 bp附近，而理论上应该是350~450 bp才对。
一旦注意到这一点，原理很快就能想到了。beads是优先结合DNA大片段，第一步的15 μL beads是把不需要的过大的片段结合弃掉，第二步的10 μL beads是把需要的“中等”大小片段结合上保留，上清中留下的过小的片段弃掉。我减小了转移的“上清”体积，则beads相对体积变大，结合的片段更多，所以让峰值大小下移。谈不上师弟的提议的对错，毕竟之前转移全部上清的时候也没有思辨过“全部”到底是多少。
这样看，如果还想要保持文库大小在350~450bp之间，应该转移更多的上清， 但操作上，65 μL确实不可避免会吸到一些第一步的beads，所以可以转移60 μL。或者将第二步的beads从10 μL略微减小到8~9 μL（如果按65:10计算应该减小到7.69 μL beads）。
至于峰值过小的坏处：
