Q. 如何判断加了tag之后，自己的目的蛋白的折叠是否受到了影响呢？
- HA-tag是常见tag里面最小的，对目的蛋白的折叠产生负面影响的概率最小，可以优先考虑。
- 用anti-tag的抗体和anti-target protein的抗体同时进行免疫荧光，如果都正常发光并且共定位了，一定程度上可以说明目的蛋白正常表达且没有影响折叠。（做Western blot只能证明表达了，不能反映折叠正确与否，但是因为免疫荧光的抗原抗体反应是天然构象，因此可以作为折叠不错的证据。当然，仍然是必要不充分条件）
- 从功能上进行回补实验应该是最可靠的方法，虽然这非常麻烦。将目的蛋白敲除后，观察出现何种表型，在mutant中回补加了tag的原蛋白，看是否能够在功能上回补。如果可以，说明这个蛋白加了tag之后的功能依然正常。
构建完加tag的质粒，记得IF/WB验证，是必须验证！
有话这里说 ↓