周记4

7.17

前一天玩手机通宵了，一下都没睡，早上九点多一点到了实验室，检查把tRNA ligation complex的质粒GFP换成tagBFP的测序结果，发现都不对，想起来是因为自己少做了一步酶切。然后又重新酶切、连接、转化。晚上十二点来挑菌菌落PCR。

中午没吃饭，直接在实验室打了一把红警，然后趴桌子上睡了四个小时。醒的时候发现肚子巨饿无比，然后去万人吃了个饭，吃完开始胃疼，疼到直不起腰。于是放弃了做完SP6启动子控制的VPR-dCas9和KRAB-dCas9的体外转录的打算。正巧观察SalI对质粒线性化的结果，发现星号活性极其显著，质粒都没主带了。就扔掉了。

回宿舍躺床上一会儿，肚子就不痛了。整理了一下龙舟队暑期打卡第一周大家的打卡情况。然后在床上看了两集三体电视剧。然后点了一点水果外卖吃掉了。

然后又回实验室，看看为啥质粒没有主带，这次加了环形对照。发现条带很单一，换了KpnI单酶切，还有有星号活性。可能是因为这次提质粒的时候用了100μl水洗脱，体系里盐离子比较多？现在也没定论。

然后就像先重新提个质粒，菌液不在了。做了个转化。

7.18

前一天的东西做完已经是7月18日早上5点了。写了个biweek work report，然后回寝室睡觉。

7.19

晚上父亲有电话打过来。一如既往的不知道说啥。

7.20

晚上在东操跑廊有人他们给我买了蛋糕，猜测是惠惠告诉了席泽，然后中途我还看到席泽出去了一趟。可能是去拿蛋糕。

晚上除冰太爽了，虽然我知道等它化一晚上就好了，但还是忍不住用扳手、螺丝刀和铁棒敲了两个小时。三点多才弄完。

7.21

早上十点到的lab，吃了一桶泡面加火腿肠，然后提了个L1-KO的RNA，本来说下午两点半做qPCR，师姐觉得赶不上，于是我放了75%乙醇后就去吃饭了，吃完ZT回lab做实验，我回寝室睡觉了，一下睡了四个多小时。到实验室开组会。

7.22

我好像两周后就要讲工作进展了，没的说呀。

早上醒的很早，然后看外面下雨特别大，我又没伞，纠结了好久，顶着一个纸箱子出去了，还好穿了拖鞋，蹚水好几次。早上做完反转，下午做了qPCR，LY师姐教我。然后查了查FANA ASO和Morpholino ASO的区别。晚上去西体训练，练完吃了个饭然后回lab构建PB-EF1a-tagBFP-T2A-HA-RTCB/DDX1/CGI-99/FAM98B/ASW.

7.23

构完就早上六点了，回去睡到下午。去实验室处理了一下qPCR的数据，然后晚上挑菌验证。回宿舍是一点。

7.24

晚上只睡了两个半小时就自然醒了，然后上了个厕所就睡不着了。看了一章西方哲学史（奥古斯丁）。然后去实验室打了两把CF，然后去吃了个早饭。

7.25~7.27忘了干啥了，只记得构建好了路垚师姐够了几个星期没弄出来的PX320-GFP. PB-EF1a-tagBFP-T2A-HA-RTCB/DDX1/CGI-99/FAM98B/ASW测序也对了，做了醇沉。

7.28

晚上要开组会才到实验室，亚强师兄讲了一下SAFB的论文的修补，然后小涵师姐讲了一篇我没看也听她不懂的enhancer相关的文献。史上最快组会。组会结束后，往PX320-GFP里加了10个sgRNA，光老师也做实验到挺晚。做完我打了两把CF。下周组会就是我了，可是不知道该讲什么。

7.29

早上七点就到实验室了，虽然前一天晚上回去已经凌晨一点了。睡了一个半小时就醒了，忘记是因为热还是因为蚊子了。然后就睡不着了，在床上看了一章西方哲学史，然后等到六点多有热水了洗了个澡，去丁香园吃了个早饭。到实验室好像没干啥事，可能鉴定了一下转化子，用sgRNA的引物鉴定的，还挺管用。

吃了午饭回宿舍睡了四个小时，醒后19点跟谭人豪两个人去西体练了肩背。我又跟他提了新生入学的时候去穿着队服搬行李的事情，他不是很愿意。

凌晨一点的时候摇了PX320-GFP-sg1~10菌。然后这一天还系统的整理了一下液氮罐和质粒，建立了索引表，盒子上标好了位置的序号。

7.30

凌晨2点40左右睡的，下午两点半醒的。然后去实验室把PB-EF1a-tagBFP-T2A-HA-RTCB/ASW的转染做了，把Des-NLS-V5-MCP-APEX2-IRES-BSD的病毒包了。好像做完这些就到饭点了。中间还发现细胞间漏水了，今天是特大暴雨，海淀区发了红色预警。去观畴园一楼吃了一碗拌面和两包酸奶。然后去实验室提了PX320-GFP-sg1~10的质粒，没来得及送样。然后打了几把CF。然后想设计一下LNC5-PJM105-EF1a-tagBFP-MSx4, LNC5-PJM105-L1-5UTR-ORF1-tagBFP-ORF2-3UTR-MSx4, LNC5-PJM105-L1-5UTR-tagBFP-MSx4, LNC5-PJM105-L1-as5UTR-tagBFP-MSx4四个质粒构建的引物。设计到一半，看22点多了，于是去桃李一楼吃了半盘焖面、一个炸鸡腿和一个煎蛋和一碗黑米粥。然后回实验室继续设计引物。到凌晨三点多终于弄好了，下了单。然后想起来这一天是周日要交biweek report，还没写。准备写一下。还有说7月31号在龙舟队群里发有氧训练的计划来着，还没开始设计。打算根据张朋前几天发的龙舟训练的论文整一下，然后发给席泽看看。弄完这些，再给转染完细胞到12h了换个液，然后带着手机回去睡觉。明天可能会醒的比较晚，醒来就要发第三周集训打卡的周报了。