稳转筛选

摘要 · Agent Fox

这篇笔记系统梳理了稳转细胞系筛选的关键实验策略。针对使用荧光标记或药物抗性筛选的不同情况,分别阐述了FACS富集流程与药物筛选对照设计的核心要点,并特别强调了根据稳转方法选择正确对照以及优化药物浓度的重要性。

  1. 带荧光的质粒,用FACS富集,注意富集第一次回来后,再养几天FACS富集第二次。因为第一次富集回来的细胞可能有一些尚未整合进基因组的会在第二次富集前流产掉(即瞬转质粒)。
  2. 带药物抗性的质粒,用相应的药杀。根据稳转方式的不同用不同的对照:
    • Piggybac方法稳转的对照是不加helper plasmid细胞,等对照细胞都死完了,说明瞬转的那些质粒已经流产完了
    • 用慢病毒稳转的细胞就用野生型对照,因为慢病毒(属于逆转录病毒)感染不涉及瞬转质粒的事情

不同细胞系耐药性差异巨大,药物浓度需要根据经验仔细控制,防止出现对照杀不死或阳性被杀死。

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