生物物理所实习体会
20210809 23:46 来生物物理所马上就五个月了，因为太久过地日夜颠倒，今天师兄拉着我来图书馆温故一下学习的感觉。按计划后天我就回南开了，写写体会。
技术方面
- 手残集锦：做转染时看错试剂瓶上的名字，等到结果出来才发现蛋白没有正确表达，前后浪费了近一周的时间；临一天做转染发现质粒不够，从好几个摇了不到半天的大肠里拼凑出十几微克质粒；妄图不洗干净培养基直接胰酶消化；PCR啥也没做出来反复思考是酶的问题还是引物的问题最后一看体积不对发现是我的问题（没加水）；反复冻融cDNA把一天前能P出来的东西给冻没了然后从垃圾桶翻了半个小时找到一天前的PCR产物抢救；转大肠就长了几个菌落在那儿怀疑是不是培养基的问题专门找别人借了平板最后发现自己没热激；提完蛋白开开心心完活儿回来发现没放冰箱白提了；煮样品煮了一夜煮到干（用金属浴）；煮样品煮到进水（用电磁炉）；电泳完不立刻转膜给扩散了；妄图用TBST转膜，发现电压太低换了Buffer，然后发现电压高了一点，又换了转膜仪，发现又高了一点，又换了电源，发现又高了一点，原来是因为里面那两块海绵吸水能力太强，我每次换Buffer都在稀释TBST里的NaCl；切胶切错大小了；妄图用载体质粒当跑胶的对照发现PCR产物比载体还大（环状DNA跑得慢）；冻存液没混匀复苏的时候不长（因为菌在下面只吸了冻存液）；氨苄加成卡那了；测序送错菌了；妄图用EP管养好氧菌；得到没加负对照的阳性结果很开心后来加了对照发现是假的；得到没加正对照的阴性结果很开心后来加了对照发现是假的。师兄M云：错误是允许的，因为科研需要不断地试错。但这个错不包括因为人为因素导致的低级失误，这纯属浪费时间。我觉得师兄说的对。我写完这些发现我就是个手残Five
- 实验记录要记清楚每一个关键步骤，一次实验做不出来之后，实验记录是改进实验条件重复实验的唯一参考。原模原样重复实验是没有意义的。要保证自己的实验操作完全没有问题，每做一次实验都保证结果不存在操作上的失误，一点点改条件直到成功。改条件的前提是得知道每一个试剂的作用。
- 样品上用马克笔记的标记也要记详细，每一个都要记好日期，事后可以对照实验记录复查。
- 不要凭脑子的瞬时记忆记一些实验细节，这不靠谱。比如加样，把EP管按顺序摆好，加一个盖一个盖子，加一个换一个位置。枪头事先摆好，事后可以复查。跑胶时，如果有两块以上，可以将Marker点在不同的泳道用于区分。
- 提前想好一天后要做的实验需要什么东西。我不止一次因为这个耽误事儿了。比如马上要转染细胞了发现上次提的质粒量不够，重新摇菌时间又不够；再比如细胞要传代了发现培养基不够，要配培养基又发现血清不够。
- 熬夜做实验真的真的没必要而且效率很低很低而且犯错概率很大很大。时间规划也是个科研狗的必备能力之一，每天饭都不能按点儿吃绝对是个无能的表现。一定是可以把吃饭睡觉和陪女朋友（你有吗？）的时间安排地妥妥的。
- 对于反转录得到的基因组cDNA这种不太稳定的模板，少反复冻融，我有一次本来能P出来的东西冻融几次就不行了。如果不是长期储存放4度就好，毕竟DNA那么稳定，在室温放两天一点事没有。然后长片段P不出来可以分开P再Gibson连接。
- 蛋白和DNA有时候预期大小和实际大小不一定一致的。一方面蛋白本身被修饰可能造成大小改变，另一方面Marker也不一定准。这时候可以多用几种Marker对照一下。
- 做截断体质粒时只需要从需要截掉的片段两端往外面P就好了，引物上加一小段同源臂，大肠会自动给修成环状。
心态方面
- 我有一个伟大的设想，想生物专业的毕业生可以不用都去科研道路上卷，可以有一份工作是达到一个及格线就可以上任的，像程序员那样。如果有，我将成为改变无数天坑专业学生命运的神。。但师兄提醒我，如果以一个生物专业学生对生命现象的理解类比一个程序员对计算机的理解，那么这个世界上没有任何一个人可以达到这个所谓的及格线，即便最顶尖的生物学家可能连百分制的题目里的1分都拿不到。所以生物学不好找工作这一点可能是学科本身所导致的，除非我们在对生命的理解上达到现在难以想象的突破才有可能改变。我觉得师兄说的对。
- 知识的获得本就是一个极度困难的工作，教科书上每一句话背后都凝结了许多人的青春，听了少数科学家光鲜亮丽的故事，竟然忘记了科研是个聚沙成塔的过程。自己一直仰望星空，却在脚踏实地这方面做得不好。99%的概率，终其一生也只能解决一丁丁丁丁点问题，好像沙漠里的一粒沙，没有这样的献身觉悟，还是早点转行，不然只能是生产学术垃圾，苦了自己也苦了纳税人。PS. 生产论文不是生产知识
- 科研方面最大的困难，我现在认为，是延迟很久很久甚至可能等很久很久也没有的正反馈，以年为单位计。在那之前，要有一个强大的内心，在压根不鸟你如何挣扎的负反馈中重振旗鼓。
- 导师竟然参评院士了，希望他成功，那样我出去就可以吹自己四个月培养出一个院士了。
人生规划方面 人际交往方面
（显然我连写总结都会半途而废，最后这俩方面我当时肯定是有想写的东西的，但当时没有写下来，现在全忘了）