实验细节很重要

今天，我做了一周的一个IP实验失败了。失败的原因是转染时错把MEM当成opti-MEM使用，导致根本没有转染成功。师兄给我说了很多他的心得，在此记录一下。

失败是允许的，但因为类似的低级错误失败是不允许的。不说花了多少经费，单说自己的时间就浪费了不少。

很多实验是连续性很强的。每一个步骤出现一丁点错误，可能结果就会面目全非。比如昨天构克隆时，PCR产物本来应该在7000bp到8000bp之间，可结果全在8000bp以上，但5个PCR产物的相对大小是正确的，所以我就没把这个现象当回事，默认是Marker不准之类的问题，继续后面的转化、PCR鉴定、测序。而且目前看来都挺顺利。但问题是，前面那个异常现象如果真的有影响，是在什么时候影响呢？现在PCR鉴定都正确，明天测序结果回来了会有影响吗？如果有影响，反而是好事，算是及时止损。如果没有影响呢？我会摇菌、提质粒、转染细胞、扩繁、收细胞提蛋白、做IP，整个下来又是一两周的时间，而可能这个时候才发现蛋白根本没有表达，于是耽误了大量精力。更糟糕的情况是，蛋白也表达了，IP也有结果了。但可能那个不明原因让我得到了错误的结果，可我并不知道，于是拿着这个结果开始了后续的实验设计，也许大半年之后发现不可能的矛盾，而此时已经不可能想到这一切是半年前的一次PCR结果不太完美了。

师兄说他做实验时常常把自己当作一个机器。戴上耳机，不带脑子，只凭直觉和习惯做实验。加样时加一个在纸上划掉一个；枪头全部事先按照加样数量摆好；EP管加一个挪一排位置等等。