TRIzol Reagent User Guide (Pub.No. MAN0001271 C.0) (thermofisher.cn)

1）收集1个12-well plate孔里的细胞，离心弃上清，加300μL TRIzol Reagent，室温下吹打混匀。（此处可冻在-20℃暂存）；

2）室温孵育5min，完全裂解细胞；

3）加60μL氯仿（三氯甲烷），盖上盖子剧烈震荡混匀，室温放3min；

4）4℃，12000rpm离心15min；离心后液体分上中下三层；

5）将上层无色水相转移到新的1.5mL EP管（约170μL，EP管里可以视RNA量多少提前加1μL RNase-Free glycogen），旧管丢掉；

6）加150μL异丙醇，4℃孵育10min；

7）4℃，12000xg离心10min；

8）弃上清，用300μL 75%乙醇洗，4℃，7500xg离心5min；

9）弃上清，在12000rpm瞬时离心，用小枪头吸干剩余液体；

10）Air dry 5-10min，用20-30μL RNase-Free H2O洗脱；55℃金属浴10min加速溶解；

11）NanoDrop定量。